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細(xì)菌抗酸染色法
1、原理與應(yīng)用
結(jié)核分枝桿菌對苯胺染料一般不易著色，若加溫或延長染色時間使其著色后，再用3%鹽酸酒精處理也不易脫色，經(jīng)此染色后，結(jié)核分枝桿菌及其他分枝桿菌呈紅色，而非抗酸菌和細(xì)胞雜質(zhì)等呈藍(lán)色。
2、材料
(1)結(jié)核病人痰
(2)抗酸染色液
(3)玻片、片夾、濾紙片、竹簽、空平皿、污物盆。
3、方法
(1)取潔凈的竹簽沾取痰中血絲或膿性痰，在清潔無油脂玻片上涂開。涂抹區(qū)約拇指蓋大。用過的竹簽放到空平皿內(nèi)待高壓滅菌。
(2)涂片自然干燥后，用片夾挾住玻片一端，通過火焰固定。
(3)涂抹面用濾紙片蓋上，然后往濾紙片上滴加石炭酸復(fù)紅染液，使濾紙片*被染液浸濕，持玻片在小火上加溫片刻然后離開火焰，此時可見到玻片上冒出蒸氣。待蒸氣消失后再加溫，如此反復(fù)3～4次，約5min，加溫時隨時添加染液勿使紙片干涸。
(4)玻片冷卻后，用接種環(huán)挑去濾紙扔到污物盆內(nèi)，流水沖洗玻片。
(5)滴加3%鹽酸酒精脫色，至涂抹均勻部位基本沒有紅色再脫下為止，水洗。
(6)滴加呂氏美藍(lán)染液30sec，水洗。
(7)吸干、鏡檢。
4、溶液配制
萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸復(fù)紅液：鹼性復(fù)紅4g，溶于95%酒精100ml，作成飽和溶液，再取該飽和液10ml與5%石炭酸溶液90ml混勻即成。
濃鹽酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)呂(Loeffer)氏美藍(lán)染色液
美藍(lán)2g，溶于95%酒精100ml中，作成飽和液。再取該飽和液30ml與0.01%氫氧化鉀水溶液100ml混合均勻即可。
細(xì)菌奈瑟染色法
1、材料
(1)染液甲
液：美蘭1g，95%酒精30ml，冰醋酸50ml，蒸餾水100ml。
第二液：結(jié)晶紫1g, 95%酒精10ml, 蒸餾水300ml。
以上液二份，與第二液一份混合之。
(2)染液乙，黃叱精1或2g，熱蒸餾水300ml，待溶解后過濾。
2、染色法
(1)涂片按常規(guī)法固定后，滴加奈瑟染液甲液數(shù)滴于涂片上，15～30 Sec，水洗。
(2)用奈瑟染液乙液復(fù)染10～30秒鐘。
(3)迅速用水洗，吸干、鏡檢。
3、結(jié)果
菌體呈鮮明、異染顆粒呈深紫蘭色。
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